仪器核心原理与读数解读
1.检测原理
基于朗伯-比尔定律,通过微量检测基座(光程多为0.05–1mm),对1–5μL核酸/蛋白样品进行260nm、280nm、230nm特征波长吸光度检测,换算浓度与纯度。
2.常见干扰伪影
气泡:尖峰毛刺、读数跳变
基座残留:基线抬高、A230异常
样品蒸发:微量液滴收缩,浓度虚高
光程污染:重复性差、空白异常
全流程质量控制要点
1.开机与空白质控
清洁基座:无指纹、盐斑、干涸样品,用无尘纸+70%乙醇擦拭,风干。
空白校准:使用同批次溶剂(无酶水/TE缓冲液),空白读数A260应**<0.05**。
空白不合格处理:重擦基座、更换空白溶剂、重新校准。
2.进样与操作质控
上样量严格匹配机型要求,液滴完整覆盖光路,无拉丝、无断裂、无气泡。
每次检测后立即擦拭基座,避免结晶残留。
高浓度样品先预稀释,保证在线性范围内(一般dsDNA:2–1500ng/μL,依机型)。
同一样品重复测2–3次,RSD应**≤3%**,取均值。
3.环境与耗材质控
温度:20–25℃,控温防蒸发
湿度:40%–60%,防冷凝
耗材:无酶枪头、无核酸酶离心管、无尘擦拭纸
避免通风口直吹、阳光直射、震动台面
标准物质与校准
推荐标准品:λDNA/HindIII、小牛胸腺 DNA、牛血清白蛋白 (BSA),有证书定值。
校准操作:
标准品复溶 / 稀释至靶浓度
空白校准后连续测 3 次
计算偏差与 RSD
偏差超差时执行厂家校准程序或检修光路
数据记录与合规要求
记录:仪器编号、日期、空白值、样品信息、A260/280/230、浓度、RSD、操作者。
判定:仅纯度达标 + 重复性合格数据可用于下游实验。
异常数据标记原因,不得直接剔除,需复测验证。
日常维护规程
每次实验后:70% 乙醇 + 无酶水擦拭基座,风干。
每日:检查光源状态、光纤 / 光路无遮挡。
每周:清洁仪器散热口,核查软件版本。
禁止强酸强碱直接接触基座,禁止刮擦检测面。
长期停机:盖防尘罩,定期开机暖机。